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整理|​常见几种全自动核酸提取仪

文章来源: 新浪医药       发布时间:2018-06-07

近年来,一些全自动核酸提取仪已进入了基因扩增检测领域,如Roche的MagNA Pure LC全自动核酸提取仪、ABI的ABI PRISMTM 6700全自动核酸提取仪和PRISMTM 6100核酸提取仪等。这些核酸纯化仪基本都采用硅吸附方法,如MagNA Pure LC全自动核酸提取仪,采用的吸附颗粒为表面包有一层硅的磁性微颗粒。全自动核酸提取仪器的应用,不但降低了核酸提取的劳动强度,而且减少了核酸手工提取中容易出现的操作失误,增加核酸提取的一致性和重复性。


DNA及RNA提取过程的注意事项:


DNA 是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此 DNA 的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作,如不能有效的完成 DNA 提取方面的工作,那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。


在 DNA 提取过程中应做到:


1,根据不同研究需要,保证结构的相应完整性;


2,尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、多糖及 RNA 等);


3,保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓度的金属离子。


DNA提取和质量检测


DNA的提取方法有多种,市场常使用Qiagen的提取试剂盒进行提取,关于Qiagen提取试剂及原理,进行简单的介绍:


ProteaseK:蛋白酶,消化缠绕在DNA上的组蛋白等之类的东西;


BufferAL:含有高浓度的盐酸胍的裂解液,裂解白细胞和红细胞,盐酸胍是强的蛋白变性剂,也可以使缠绕在DNA上的蛋白变性,将纯的DNA释放出来。同时提供高盐离子环境,促使DNA特异性的吸附到硅胶膜上;


加乙醇的目的:破坏溶液中的DNA分子表面的水化层,有利于DNA吸附到硅胶膜上;


Buffer AW1:含高浓度的盐酸胍和氯化钠,洗掉硅胶膜上非特异性结合的蛋白;


Buffer AW2:成分基本是Tris-Hcl、水和乙醇,作用:洗掉硅胶膜上残留的盐酸胍、氯化钠等盐离子;


Buffer AE: 10mM Tris-HCL(pH9.0)与1mM EDTA作用,将硅胶膜上吸附的DNA洗脱下来。


RNA提取和质量检测


RNA的提取条件较DNA要求严格。RNA由于自身结构和RNA酶的存在,极易降解。RNA酶是导致RNA降解的主要物质,RNA酶广泛存在人的皮肤和环境中,此酶非常稳定,常规高温高压灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的RNase完全失活。


经高压灭菌的一次性使用的塑料制品如试管和离心管等基本上无RNase,可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿经常有RNase污染,使用前必须于180℃干烤8h以上,或用0.1%焦炭酸二乙酯(DEPC)的水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯、试管和其他用品。DEPC是RNase的强烈抑制剂。同时需要注意的是:DEPC具体致癌性,操作时必须小心。


常用的RNA提取方法,有TRIzol试剂,苯酚,异硫氰酸胍-酚法等:


TRIzol法是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂,在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性,氯仿离心,异丙醇沉淀RNA。


苯酚法,将细胞置于十二烷基磺酸钠(SDS)的缓冲液中,加等体积水饱和酚,剧烈震荡,离心形成上层水相和下层酚相,核酸溶于水相。


异硫氰酸胍-酚法:用过异硫氰酸胍与β-疏基乙醇共同作用抑制RNase的活性。异硫氰酸胍与十二烷基肌氨酸钠作用使蛋白变性,释放RNA,在酸性条件下,DNA同蛋白质一起离心下来,RNA溶在上清中,该方法提取RNA纯度高,完整性好,适合纯化mRNA,逆转录和文库构建。


还有一些试剂盒,如RNA plant plus植物总RNA提取试剂盒(TIANGEN),总RNA提取试剂盒(Qiagen),总RNA提取试剂盒(Promega),使用简单、快速、高效,均能获得满意结果。


一、百泰克全自动核酸提取仪


整理|​常见几种全自动核酸提取仪


设计特点


生物样本库的核酸质量取决于保存和提取技术,百泰克全自动核酸提取仪自推出以来,不断发展更新提取技术,仅一年时间,该仪器不仅从仪器性能参数上,而且从核酸提取技术上迅速发展。百泰克全自动核酸提取仪把磁珠法的高得率、高灵敏度和仪器的自动化很好的整合在一起,使之能够得到很实用的应用。


1、磁棒法设计,通量有32通量和96通量两种,对于粘稠样本(粘稠血、组织)可以提取。


2、2.2ml容量的96深孔板做样本槽,可以同时处理32或96样本!11ml大容量试剂条,工作体积最大5ml!


3、震荡加热提取全自动一体设计。


4、触摸屏编程,简单方便。不需要用编程语言来编程序或者由厂家来帮你设置程序。


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技术特点:


1、 动物组织基因组DNA提取


特点:组织块直接上机提取DNA(不需要研磨消化),得到基因组DNA可用于高灵敏的下游分析,如定量PCR、临床分子诊断、基因表达分析、基因分析、法医及传染性疾病研究等。对于容易降解的动物肝脏组织,胰脏组织,海洋水产样本、昆虫样品,本仪器也可提出核酸。


2、 凝固血DNA提取


特点:凝固血直接上机提取DNA(不需要研磨消化),得到基因组DNA可用于高灵敏的下游分析,如定量PCR、临床分子诊断、基因表达分析、基因分析、法医及传染性疾病研究等。


3、   具有温控模块


优势:96通量全自动核酸提取仪具有加热制冷模块。


二 德国耶拿—全自动核酸提取仪的新标准


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InnuPure C16 touch全自动核酸提取仪将人们从繁琐的核酸提取纯化过程中解放出来,大大提高了工作效率和产物质量。您只需要加入样本,选择相应的提取程序,按下"start"即可轻松获得纯净的核酸,是您开展分子实验和检测工作的得力帮手。


Dual Chemistry Technology


2005年耶拿公司发明了专利性的核酸提取技术DC-Technology(双缓冲液技术),采用独特的裂解缓冲液和新型的结合缓冲液,无需使用高盐结合,具有以下优点:


1、提供了温和的反应条件和更为稳定的裂解环境,最大限度的提高裂解样本、降解蛋白质的效率,提高核酸提取得率


2、提供了更为温和的化学环境,使得核酸遭受更少的化学剪切,从而获得更为完整的核酸片段


3、采用低盐浓度缓冲液可以有效减少后续的洗涤步骤,节约时间


4、得到的核酸可以直接用于下游实验,可以长久储存


Smart Extraction技术——新一代核酸提取技术


2016年耶拿公司又发明了专利性的新一代核酸提取技术Smart Extraction,该技术打破常规核酸提取需要借助介质吸附核酸的传统,提取过程无需酚/氯仿、无需离子交换、无需离心柱、无需硅胶膜、无需磁珠,仅需tip上下吹打即可完成。提取得到的核酸得率高、纯度好,操作简单,速度快,易于实现自动化。现在已有配套耶拿公司自动化仪器InnuPure C16 touch、GeneTheatre、CyBio SELMA、CyBio FeliX的试剂盒。


Smart Extraction操作流程


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应用实例


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Smart Extraction技术 vs 磁珠法——核酸提取得率纯度


三 Hamilton全自动核酸提取解决方案


Hamilton公司诞生于1947年,今年正好迎来70周年庆典。作为历史悠久、技术专利积累深厚的全球知名工作站品牌,Hamilton一直以来专注于液体处理产品线的研发,至今移液产品线拥有Microlab Nimbus、Microlab STAR、Vantage系列三大平台,搭配灵活便捷的推拉式载架,辅以强大的开放性软件,能满足不同应用方向的需求,自动化液体处理工作站平台中值得信赖的合作伙伴!


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Vantage 平台


自动化液体处理工作站的应用方向广泛,涵括基因组学、蛋白质组学、细胞组学、药物研发、临床诊断、生物样本库、法医等范畴。其中,核酸提取作为最常见的应用方向之一, Hamilton三大平台为多种多样的核酸提取方法如过柱/膜法、磁珠法(底吸法、磁棒法)皆提供了标准解决方案,可满足用户对于核酸提取过程中不同通量、差异化的样本种类、样本体积各异及处理速度快慢的个性化需求。


整理|​常见几种全自动核酸提取仪


1 过柱/膜法-Genomic STARlet / AutoLys STAR


2  磁珠法-底吸法-STAR/STARlet


3  磁珠法-磁棒法-KingFisher STARlet/Nimbus HD


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四 上海科华全自动核酸提取仪—NX96


产品介绍:


基于全球知名的Hamilton移液平台,注入科华多年临床核酸科研成果,实现一次处理96样本且可不断优化、升级的全自动核酸提取系统


占地小,便于摆放


设备尺寸长x 宽 x 高 = 97 x64 x 67 cm。


触屏操作,简单方便


仪器自配电脑,最新版windows8.1系统


自动化程度高,一次性处理至少96个样本,可拓展性强


提取过程全程无需人工参与,自动化程度高,排除人为因素干扰


96个样本提取完成只需4h


整理|​常见几种全自动核酸提取仪


以上几种是整理出的市场上所见较多的全自动核酸提取仪,希望对大家有所帮助。


注:文章内的所有配图皆为网络转载图片,侵权即删!

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